1、
为解决人类治疗时出现如人体免疫系统识别而产生人抗鼠抗体等问题,科学家们通过构建人免疫蛋白(Ig)转基因小鼠来生产单克隆抗体。
(1)构建人免疫蛋白转基因小鼠时,为避免小鼠细胞自身Ig基因表达而产生的免疫排斥,要选择自身Ig基因缺陷的小鼠___细胞作为受体细胞,并通过___操作导入重组DNA。将经筛选后受体细胞进行____、再将胚胎移植到_____处理的代孕鼠子宫内,经代孕母鼠分娩后培育、筛选获得人免疫蛋白(Ig)转基因小鼠。
(2)制备单克隆抗体时,取经抗原免疫的转基因小鼠脾细胞和_____,电刺激使之融合,筛选出杂交细胞后进行抗体检验,然后____培养能产生抗体的阳性细胞并再次进行抗体检验,筛选出的阳性克隆可称为单抗细胞株。
(3)检测受体细胞是否合成抗体的方法是__;基因工程制备的单抗与杂交瘤技术制备的单抗相比,最突出的优点是___________。
A.纯度高 B.亲合力强 C. 非异源性 D. 稳定性高
受精卵 显微注射 胚胎体外培养 同期发情处理 骨髓瘤细胞 克隆 抗原抗体杂交 C
基因工程技术的基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
(1)构建人免疫蛋白转基因小鼠时,为避免小鼠细胞自身Ig基因表达而产生的免疫排斥,要选择自身Ig基因缺陷的小鼠受精卵细胞作为受体细胞,并通过显微注射方法导入重组DNA。将经筛选后受体细胞进行胚胎体外培养、再将胚胎移植到同期发情处理的代孕鼠子宫内,经代孕母鼠分娩后培育、筛选获得人免疫蛋白(Ig)转基因小鼠。
(2)制备单克隆抗体时,取经抗原免疫的转基因小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞,电刺激使之融合,筛选出杂交细胞后进行抗体检验,然后克隆培养能产生抗体的阳性细胞并再次进行抗体检验,筛选出的阳性克隆可称为单抗细胞株。
(3)检测受体细胞是否合成抗体的方法是抗原抗体杂交;基因工程制备的单抗与杂交瘤技术制备的单抗相比,最突出的优点是非异源性,可以减少免疫排斥反应,故选C。
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